血清使用中常見(jiàn)問(wèn)題
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胎牛血清、新生牛血清、小牛血清有何區別？
胎牛血清：指健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清，其胎球蛋白較多，血清白蛋白含量高，而r-球蛋白含量極低甚至沒(méi)有，并富含多種生長(cháng)因子，是培養細胞zuiyou質(zhì)的血清。
新生牛血清：指健康母牛正常分娩后不久采集加工而成的血清，其內含多種生長(cháng)因子。
小牛血清：指出生后飼養一定時(shí)間（一周至六個(gè)月）再采集加工而成的血清，因與外界接觸時(shí)間過(guò)長(cháng)，故血清內r-球蛋白含量較高，不利于細胞培養，特別是不利于病毒研究與疫苗生產(chǎn)。
1、 如何儲存和解凍血清才不會(huì )使產(chǎn)品質(zhì)量受損？
將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。
長(cháng)時(shí)間儲存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。
2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理？
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會(huì )影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清（400g，1-2分鐘）或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里（一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因為沉淀會(huì )堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾）。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì )再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì )自然消失。
3. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究，培養ES細胞，昆蟲(chóng)細胞和平滑肌細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。
4. 有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長(cháng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察，像是“小黑點(diǎn)"，常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì )使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增
5. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會(huì )出現沉淀?
GIBICO的胎牛血清 沒(méi)有預老化，儲存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。這應該不會(huì )影響血清的質(zhì)量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。
6. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
解凍血清時(shí)，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
解凍血清時(shí)，請隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。
請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì )變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩定的成分也會(huì )因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì )造成沉淀物的增多。
7、細胞培養中如何防止黑點(diǎn)生成？
（1）盡可能地減少血清凍融次數；
（2）培養基無(wú)需37℃水??；
（3）培養基保持最佳PH值7.0-7.2；
（4）嚴格控制配制培養基的水質(zhì)，容器定期刷洗；
（5）掌握細胞傳代的最佳時(shí)機，細胞切勿生長(cháng)過(guò)老。
本篇文章轉至實(shí)驗之聲
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